Наиболее распространены колориметрические методы определения белка в крови, основанные на цветных реакциях белков с соответствующими реактивами. В качестве унифицированного рекомендован биуретовый метод. В плазме крови содержится более 100 различных белков, среди которых большинство гликопротеиды, в состав которых входят углеводы. Подавляющее большинство сывороточных белков образуется в печени. В основе классификации плазматических белков в крови лежит их подвижность при электрофорезе в свободной среде.
Различают 5 основных фракций (групп) белков крови: альбумины, α-1, α-2, β, γ-глобулины. Определенное клиническое значение имеет отношение суммы альбуминов (более растворимых белков) к сумме глобулинов (менее растворимых) – так называемый альбумин-глобулиновый коэффициент, уменьшение которого служит показателем воспалительного процесса, γ-глобулины – белки, ответственные за гуморальные факторы иммунитета, в их составе различают 5 различных групп иммуноглобулинов: Ig A, Ig D, Ig Е, Ig М, Ig G. В отличие от других белков в крови, они синтезируются не в печени, а в лимфоцитах. Наиболее перспективными методами определения фракций белка являются электрофоретические – зональный электрофорез на бумаге, в агаровом, крахмальном и полиакриламидном геле.
Общий белок в крови - определение содержания небелковых азотистых соединений
К ним относятся азот, мочевина, аминокислоты, креатин и креатинин, мочевая кислота, аммиак, билирубин и др. Азотистые низкомолекулярные вещества крови в основном представлены шлаками, которые должны быть выведены из организма, так как количество потребляемых с пищей протеинов всегда больше, чем синтезируется новых тканевых белков. Около половины остаточного азота составляет азот мочевины – конечного продукта обмена аминогрупп.
Основной путь связывания аммиака в белке в крови заключается в синтезе в печени мочевины, которая выводится вместе с другими азотистыми шлаками (мочевой кислотой, креатинином и др.) путем фильтрации в почечных клубочках. В отличие от них продукт распада гемоглобина – билирубин – выводится с желчью. Из внеэритроцитарного гемоглобина, связанного с плазматическим общим белком в крови гаптоглобином, образуется билирубин, который циркулирует в плазме в виде комплекса с альбумином.
Общий белок называется в лабораторной практике непрямым (неконъюгированным), поскольку непосредственно не реагирует с диазореактивом. В печеночных клетках билирубин связывается с двумя молекулами глюкуроновой кислоты, в результате чего образуется растворимый в воде билирубин – глюкоронид (прямой или коньюгированный). Он выводится с желчью в кишечник, где восстанавливается в уро- и стеркобилин, часть которого снова всасывается в кровь и выводится через почки, основная масса экскретируется с калом.
Диагностическое значение при определении общего белка в крови имеет исследование каждого из указанных веществ и суммарное определение содержания азота. Основные методы определения содержания небелкового азота – это азотометрический метод Кьельдаля и гипобромидные методы. Унифицированными методами определения уровня мочевины в крови являются уреазный метод по реакции с фенолгипохлоритом и экспресс-метод с применением индикаторной бумаги «Уреатест».
Концентрацию креатинина в общем анализе белка определяют с помощью колориметрических и ферментативных методов. Распространенными методами определения концентрации билирубина являются колориметрические, основанные на реакции Ван-ден-Берга. Среди них наиболее унифицированным представляется метод определения билирубина по диазореакции в присутствии акселератора, позволяющий исследовать общее содержание билирубина, свободную и связанную его фракции (метод Ендрашика – Клегхорна – Грофа).
Белок в крови - определение содержания минеральных веществ плазмы крови
Они представлены преимущественно катионами Na+, К+, Са2+ и анионами Cl-, HCO3-, НРО42-. Основными методами определения белка в крови и электролитов являются химические, пламенная фотометрия и спектрофотометрия, потенциометрическое определение и др. В качестве унифицированного метода определения в сыворотке (плазме) содержания калия, натрия и кальция принят метод пламенной фотометрии.
Определение уровня сывороточного железа основано на освобождении его из белкового комплекса, осаждении белка и последующей цветной реакции железа с одним из реактивов, дающих цветную реакцию. Унифицированным методом определения содержания железа в сыворотке является метод с использованием цветной реакции с батофенантролином.
