Взятие крови можно производить меланжерным (в меланжеры или смесители) или пробирочным методом (в пробирки, по Н.М.Николаеву) с последующим подсчетом количества эритроцитов в крови счетной камере под микроскопом. Подсчитывают эритроциты в крови и в фотоэлектрическом эритрогемометре, а также с помощью целлоскопа. В качестве разводящего раствора чаще всего используется изотонический раствор хлорида натрия.
Количество эритроцитов в крови - как рассчитать?
Наиболее распространенным является метод подсчета количества эритроцитов в камерах Бюркера с сеткой Горяева. Для этого кровь из пальца набирают в меланжер до метки 0,5, затем физиологическим раствором хлорида натрия доводят до метки 100 (разведение в 200 раз). Полученную взвесь эритроцитов в крови тщательно перемешивают, покручивая меланжер, затем ею заполняют камеру, подсчитывают количество эритроцитов в пяти больших квадратах сетки Горяева и к полученной цифре добавляют четыре нуля. Нормальное количество эритроцитов у женщин в крови 3,8 x 1012 – 5,5 х 1012 /л, у мужчин 4,5 х 1012 – 5,0 х 1012 /л.
Индексы красной крови – это среднее количество гемоглобина в одном эритроците и цветовой показатель. Определение среднего количества гемоглобина в одном эритроците в крови производят делением концентрации гемоглобина на число эритроцитов в 1 мкл. В норме 1 эритроцит содержит 33х 10-8 мкг, или 33 пг гемоглобина (1 пг = 1х10-12 г). Допускаются колебания от 27 до 33,4 пг.
Величину 33 пг, составляющую норму содержания гемоглобина в одном эритроците, условно принимают за единицу и обозначают как цветовой показатель. По цветовому показателю судят о том, является ли содержание гемоглобина в эритроцитах исследуемого лица нормальным, пониженным или повышенным по отношению к норме. Гиперхромия, т.е. увеличение среднего содержания гемоглобина в одном эритроците, дающее цветовой показатель выше единицы, зависит исключительно от увеличения объема эритроцитов, а не от повышенного насыщения их гемоглобином. Перенасыщения гемоглобином не бывает, нормальный эритроцит насыщен им до предела. На практике вычисление цветового показателя производят по формуле:
ЦП = 3 x гемоглобин ( в г/л) / три первые цифры числа эритроцитов в миллионах
В норме цветовой показатель колеблется от 0,85 до 1,15.
Определение гематокритного числа эритроцитов в крови
Определение гематокритного числа в крови дает представление о соотношении между объемом форменных элементов и объемом плазмы. Гематокритное число в крови определяется методом центрифугирования крови в градуированных гематокритных трубках, капиллярах или путем расчета в автоанализаторах. Гематокрит – это два коротких стеклянных градуированных на 100 делений капилляра с диаметром просвета около 1 мм в специальной насадке, которая крепится на вертикальном валу двигателя центрифуги.
Капилляры предварительно обрабатываются антикоагулянтом. Затем в них насасывают венозную или капиллярную кровь и центрифугируют в стандартных условиях, либо в обычных центрифугах со скоростью 3000 об/мин, либо в специальных центрифугах при 16 500 об/мин в течении 1 мин. Форменные элементы крови, как имеющие больший удельный вес, под влиянием центробежной силы оседают у дистального конца капилляра.
Нормальные величины гематокритного числа у мужчин колеблются в пределах 40/60 – 48/52 или 40 – 48%, у женщин 36/64 – 42/58 или 36 – 42%,
Увеличение клеточной массы крови называется полицитемией, а уменьшение – олигоцитемией.
Определение диаметра эритроцитов в крови
Измерение диаметра эритроцитов в крови и графическую регистрацию распределения эритроцитов в крови по величине (эритроцитометрическая кривая, кривая Прайса – Джонса) можно производить с помощью прямых микроскопических и электронно-автоматических методов. Прямой микроскопический метод измерения диаметра эритроцитов чрезвычайно трудоемок и поэтому лучше пользоваться электронно -автоматическим методом.
Эритроцитометрическая кривая Прайса – Джонса в норме правильной формы с вершиной («пиком») на 7,2 мкм и довольно узким основанием в пределах 6 – 9 мкм.
Определение осмотической резистентности эритроцитов в крови
Принцип метода состоит в том, что эритроциты в гипертонических солевых растворах сморщиваются, а в гипотонических набухают. При значительном набухании наступает гемолиз. В пробирки с раствором хлорида натрия различной концентрации (от 0,70 до 0,22 %) вносят один и тот же объем крови (0,02 мм).
Через час пробирки центрифугируют и определяют начало гемолиза по легкому порозовению раствора, а полный гемолиз – по интенсивной красно-лаковой окраске раствора. В норме минимальная резистентность у взрослых людей колеблется между 0,40 и 0,46% хлорида натрия, максимальная – между 0,34 – 0,32 % хлорида натрия.
Определение количества ретикулоцитов – молодых эритроцитов в крови
Количество ретикулоцитов в крови по выходе из костного мозга в периферическую кровь в течение 6 ч превращается в зрелый эритроцит. Количество молодых эритроцитов подсчитывают в мазках крови, прижизненно окрашенных 1%-ным раствором бриллианткрезилблау. Для этого на предметное стекло с раствором бриллианткрезилблау наносят каплю крови и готовят мазок. Этот мазок помещают во влажную камеру на 10 мин. После этого его подсушивают на воздухе и считают количество ретикулоцитов в крови под иммерсионным объективом по отношению к 1000 эритроцитов. Результаты исследования выражают в промилле (%о). В норме содержание их в периферической крови составляет 2 – 10%о.
Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) в крови
За пределами кровеносного русла (если предотвращено свертывание крови) клетки крови оседают (седементируют), оставляя сверху слой плазмы. Этот феномен лежит в основе определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) в крови, которая выражается в миллиметрах плазмы, отстаивающейся в течение часа. Оседанию эритроцитов предшествует их агрегация типа монетных столбиков. От того, как происходит их формирование, и зависит СОЭ.
Наиболее распространен микрометод определения СОЭ в модификации Панченкова. Для этого используют специальные градуированные капиллярные пипетки, имеющие просвет в 1 мм и длину 100 мм. Пипетку предварительно промывают антикоагулянтом – 3,7%-ным раствором цитрата натрия. Затем набирают в нее этот раствор до метки «Р» и выливают в видалевскую пробирку. Далее той же капиллярной пипеткой из пальца набирают два раза кровь до метки «К» и выливают ее каждый раз в ту же пробирку.
Хорошо смешав, насасывают смесь в пипетку до отметки «О», отмечают время и ставят ее в штатив. Через час отсчитывают по делениям на капиллярной пипетке величину отстоявшегося столбика плазмы. Записывают величину СОЭ в миллиметрах в час. В норме у женщин она составляет до 14 – 15 мм в час, у мужчин – до 10 мм в час. СОЭ увеличивается у женщин во время беременности (после 3-го месяца) и остается повышенной около трех недель после родов (что зависит от увеличения объема плазмы, повышения содержания в крови глобулинов, холестерина и уменьшения содержания кальция), во время менструации (умеренно). Ускорение оседания эритроцитов наблюдается при сухоедении и голодании.
